Иммуноферментный анализ

Что такое анализ крови на ИФА

Развитие современной медицины в мире диагностики не перестает удивлять своими достижениями, и теперь врачу нет необходимости высказывать предположения о вероятном диагнозе, опираясь лишь на косвенные признаки. Создание и введение в мир лабораторных исследований иммуноферментного анализа крови (ИФА) позволяет быстро и точно определить не только наличие возбудителя, но и многие другие характеристики заболевания.

История создания и развития ИФА

Данный метод исследования крови стал применяться в практической медицине еще в середине прошлого столетия – где-то в 60-х годах. Изначальной его целью были научные исследования в области гистологии, которые ограничивались поиском и изучением клеточной антигенной структуры биологических видов. Анализ крови методом ИФА основан на взаимодействии родственных антигенов (АГ) и специфических антител (АТ), с формированием комплекса «антиген-антитело», определяемого ферментом.

Такой феномен подтолкнул ученых к решению, что способ можно применять для распознавания белковых соединений различных классов, образующихся в сыворотке крови при попадании в организм возбудителя. Из-за своей непосредственной вовлеченности в функционирование иммунной системы эти соединения получили название иммуноглобулины (ИГ, Ig), а открытие стало величайшим прорывом в лабораторной диагностике.

При этом активно использовать этот высокочувствительный метод стали лишь в 80-х годах, и доступен он был только в узкоспециализированных медицинских учреждениях. Самыми первыми получили возможность пользоваться иммуноферментными анализаторами станции и центры переливания крови, венерологические и инфекционные лечебные заведения. Это было связано со стремительным распространением «чумы XX века» – СПИДа, и требовалось срочное принятие диагностических и терапевтических мер.

Возможности методики

Область применения анализа крови на ИФА довольно широка – на данный момент невозможно и представить, насколько бы усложнились поиски причины множества заболеваний. Такое исследование теперь применяется практически во всех медицинских отраслях, даже в онкологии. Хоть для неосведомленных это сложно понять, но в отдельных случаях проведя его, удалось спасти жизнь пациентам, обнаружив опухоль на ранних стадиях.

В современных диагностических центрах, лабораторные обследования представлены не только онкомаркерами – они снабжены внушительным арсеналом панелей для проведения данной диагностики. С их помощью можно определить множество патологических состояний, таких как гормональные отклонения и инфекционные процессы различного происхождения.

Кроме этого, проведение и расшифровка анализа крови ИФА даст возможность отследить действие медицинских препаратов на организм больного человека и даже животного. Последнее широко применяется в ветеринарных клиниках, помогая сохранить здоровье нашим домашним питомцам либо кормильцам, обеспечивающим стабильное поступление мясной, молочной продукции и незаменимых в рационе яиц.

Так, в результате забора всего нескольких миллилитров венозной крови и ее диагностики методикой ИФА, врач, описав материалы исследования, сможет определить:

  • гормональное состояние, включающее биологически активные вещества половых и щитовидной желез, а также надпочечников;
  • наличие бактериальной и вирусной инфекции (гепатит В и С, сифилис, герпес, хламидиоз, туберкулез, мико- и уреаплазмоз, ВИЧ, TORCH) и другие заболевания данной природы;
  • признаки жизнедеятельности возбудителей патологического процесса, завершившегося выздоровлением и перешедшего в стадию образования антител (иммунного ответа).

Такие комплексы гораздо проще распознаются и ликвидируются клетками иммунитета. Остаточные явления в виде антител во множественных случаях содержатся в крови пожизненно, что практически сводит риски повторного заражения к нулю.

Разновидности иммуноглобулинов

Существует несколько видов антител, причем каждый из них вовлекается в процесс иммунного ответа на определенном этапе. К примеру, первыми в ответ на попадание АГ в организм образовываются иммуноглобулины класса М (IgM). Самые высокие их показатели наблюдаются в первые дни заболевания.

Затем иммунная система запускает в плазму ИГ класса G (IgG), ответственные за полное уничтожение антигенов и выздоровление больного. Позже они так и продолжают находиться в крови, тем самым подготавливая иммунитет к повторному попаданию идентичного возбудителя. По такому принципу работает вакцинация. При введении ослабленных антигенов патологических микроорганизмов, в плазме появляется и остается циркулировать много иммуноглобулинов.

И, впоследствии, если происходит патогенный контакт, они быстро справляются с инфекцией, уберегая организм от угрозы здоровью. IgА в большом количестве сосредоточены в слизистых оболочках, преграждая попаданию внутрь организма болезнетворных вирусов и бактерий. IgЕ ответственны за уничтожение паразитарных инфекций, а также существует множество других иммуноглобулинов, участвующих в ответе иммунитета.

Основными интересующими объектами для лабораторной диагностики считаются Ig классов M, G и A. По уровню их концентрации можно определить стадию заболевания и узнать, какими инфекционными болезнями человек болел в своей жизни. Например, можно проверить была ли в анамнезе ветряная оспа или краснуха. Врачу, чтобы узнать присутствует ли определенный вид АТ или АГ в организме пациента или концентрацию какого-либо гормона, нет необходимости назначать множественные лабораторные обследования – достаточно выписать направление на ИФА.

Суть методики

Иммуноферментный анализ крови на паразитов и других микроорганизмов – вредителей здоровью организма дает возможность не только установить наличие возбудителей, но и расскажет об их численности в плазме крови пациента. Таким образом, подобное исследование позволяет произвести и качественный и количественный анализ патогенных микроорганизмов, обнаруженных в сывороточном материале.

Уровень концентрации возбудителя в значительной мере оказывает влияние на развитие инфекции и скорость выздоровления, поэтому качественная оценка считается не менее важной, чем количественная. Ей отводится далеко не последняя роль как при лечении детей, так и взрослых. Но как же получается, что ИФА удается распознавать такой обширный диапазон микроорганизмов, которые паразитируют в теле человека и животных, принося вред и снижая качество жизни?

Методика исследования строится на нескольких вариантах (прямой и непрямой – конкурентный и неконкурентный) выполнения поставленных задач, причем каждый из них предназначен для определенных целей. Такой подход позволяет производить целенаправленный поиск, и в кратчайшие сроки выявлять причину той или иной патологии. Для обнаружения Ig разных классовых категорий применяется 96-луночный планшет (полистироловая панель), а в его лунках расположены сорбированные рекомбинантные белки. Они исполняют роль антигенов, и на начальном этапе находятся в твердой фазе.

При попадании в лунку с плазмой крови, антигены или антитела идентифицируют в связи со своей направленностью объект, и формируют комплекс (АГ – АТ). Данное образование закрепляется ферментным соединением (коньюгатом), который впоследствии проявится измененным окрашиванием лунки. ИФА производится на специфических тест-системах, изготовленных в профильных лабораториях и укомплектованных полным набором реагентов.

Данный анализ можно выполнять на вошерах – промывных аппаратах и считывающих спектрофометров, но они требуют ручного труда. Безусловно, лаборанту в несколько раз удобнее и быстрее осуществлять все манипуляции на полностью автоматизированных приборах. При их использовании сотрудники лаборатории освобождаются от большого объема монотонной деятельности – промывания, закапывания и остальной рутины, но не все лечебные учреждения могут себе позволить такую дорогостоящую аппаратуру

Интерпретация материалов исследования исключительно компетенция специалиста лабораторной диагностики – только ему могут рассказать результаты о специфике и тонкостях протекания заболевания. При этом врач должен обязательно учесть возможность получения ложноотрицательных или ложноположительных ответов.

Расшифровка материалов

Итогом качественной иммуноферментной диагностики должно стать однозначное заключение – найден искомый микроорганизм или нет в данном образце крови. Количественный анализ будет указывать на уровень концентрации и может выражаться двумя способами – значением в цифрах либо количеством знаков «+».

Анализируемые показатели

В процессе исследования производится тщательное изучение основных иммуноглобулинов, вовлеченных в иммунный ответ, таких как:

  • IgM – обнаружение данного класса означает развитие острой формы инфекционного заболевания. Отрицательный результат по поиску IgM может быть как свидетельством отсутствия искомого возбудителя, так и перехода болезни в хроническое течение.
  • IgА – определение этого класса при отсутствии IgM в большинстве случаев сигнал о хронической либо скрытой форме развития инфекционной болезни.
  • IgM и IgА (одновременное наличие) – положительные результаты на оба вида свидетельствует о самом пике острой формы патологии.
  • IgG – его наличие указывает на трансформацию заболевания в хроническую форму либо на выздоровление и формирование иммунитета к определяемому агенту.

Появление и накопление определенного класса ИГ происходит на разных временных этапах. Так, к примеру, первыми появляются IgM, приблизительно на 5 день от попадания возбудителя. ИГ находятся в крови около 5–6 недель, и затем постепенно пропадают. В это время они доступны к определению посредством ИФА. Ориентировочно через 3–4 недели от начала болезни появляются IgG, которые впоследствии могут оставаться на протяжении нескольких месяцев. Но в анализе их не всегда удается обнаружить.

IgА образуются в крови в период 2–4 недели, при этом 20% их содержится в сыворотке, а 80% – в секрете слизистых оболочек. Как правило, эти иммуноглобулины пропадают на протяжении 2–9 недель, что свидетельствует об уничтожении возбудителя и выздоровлении больного. Если же ИФА все же показывает наличие IgА, то это сигнализирует о переходе процесса в хроническую форму.

Варианты результатов анализа

В зависимости от полученных данных, ответы ИФА могут быть выданы на бланке в виде таблицы с полным списком всех АТ и АГ и указанием положительной либо отрицательной реакции. В определенных ситуациях будет выведено количественное значение – резко положительный, положительный, слабоположительный или отрицательный результат. Второй вариант указывает на количество содержащихся АТ в изучаемом образце крови.

Кроме вышеперечисленных значений, в процессе ИФА исследуется еще один количественный параметр – индекс авидности АТ, исчисляющийся в процентах. Он показывает, сколько длится заболевание – то есть чем выше показатель, тем больше времени идет развитие патологии.

Альтернативный способ ИФА

Иммуноферментный анализ крови – достаточно известная и распространенная диагностика. Возможно, о ней никогда и не слышали некоторые, но существует одна еще менее известная широкому кругу людей разновидность данного исследования, при котором берется образец не крови. Эта методика называется анализ кала на скрытую кровь, и во многих случаях она позволяет избежать дополнительных изнуряющих процедур, к тому же еще сопровождающихся неприятными ощущениями.

Анализ ИФА на скрытую кровь (молекулы гемоглобина) дает возможность обнаружить кровотечение органов пищеварительной системы, даже незначительное, признаки которого в стуле больного, как говорится, невооруженным глазом не найти. Иммуноферментный анализ скрытой крови в испражнениях человека за короткое время способен показать язвенную болезнь, полипоз, дивертикулез, опухоли, которые на ранних стадиях не сопровождаются определенной симптоматикой.

На сегодняшний день созданы тысячи разновидностей тест-систем иммуноферментной диагностики, которые предоставляют возможность находить АТ и АГ огромного списка патологий. Поэтому данный анализ применяется почти во всех отраслях медицины, для любой возрастной категории. А абсолютная безвредность позволяет прибегать к нему и при беременности, и для диагностики ослабленных пациентов.

Иммуноферментный анализ крови с расшифровкой показателей

Иммунная и ферментативная реакции

Как явственно следует из названия, анализ крови ИФА включает в себя несколько составляющих, а именно – иммунную и ферментативную реакции.
Иммунная реакция позволяет связать клеточные элементы и болезнетворные микроорганизмы, а ферментативная дает возможность визуализировать и оценить результат предыдущей реакции.

Рассмотрим каждую реакцию более подробно.

Что такое иммунные реакции?

Иммунными называются специфические реакции, позволяющие связать антиген с антителом и создать иммунный комплекс. Что же это значит? В первую очередь, необходимо понимать, что любая клеточная поверхность содержит молекулы, содержащие данные о клетке, называющиеся антигенами и подразделяющимися на:

Индивидуальные антигены, несмотря на некоторую схожесть, имеют и множество различий. Они имеются у одного конкретного организма и никогда не повторяются в других. Видовые антигены можно обнаружить в организмах тех или иных видов живых существ. Так, например, обезьяны, лошади или собаки имеют свой, ни на что не похожий антиген. Именно поэтому антигены этого типа используются иммунной системой для распознавания своих и чужих клеток, что, собственно говоря, и лежит в основе иммуноферментного анализа крови.

Как распознаются антигены? Здесь все достаточно понятно. Говоря простым языком, клетка, являющаяся иммунной, отлавливает клетку, вызвавшую у нее «подозрение», и сравнивает ее антиген с имеющимся в памяти описанием. Если антиген вызвавшей сомнение клетки соответствует ему, то иммунная клетка «отпускает» ее и отправляется дальше. Если же описание отличается, то ответ организма на угрозу один – уничтожение. Причем распознавание «врага» в данном случае равняется почти 100%.

Иммуноанализ сэндвич-типа Sandwich-type immunoassay

Рис. 2. Схематическое изображение иммуноанализа «сэндвич»-типа. АТп — антитело подложки, АТд — детекторное антитело, АГ — антиген, М — метка, ковалентно связанная с детекторным антителом, П — подложка, на которую сорбируется антитело подложки.

В данном варианте иммуноанализа (Рис.2) используется пара антител, специфичных к пространственно удаленным эпитопам исследуемого антигена.

I. Сорбция антител подложки

В лунки 96-луночного планшета для проведения иммуноанализа сорбируют антитела подложки 1-2 мкг в лунку в 100 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS). Инкубация проводится в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка (2-х кратная) несвязавшихся молекул антигена осуществляется фосфатно-солевым буфером содержащим 0,1% Tween-20 (PBSТ).

II. Блокировка

Для блокирования мест неспецифичного связывания лунки планшета заполняют PBST и инкубируют в течение 10-15 минут при комнатной температуре.

III. Инкубация с антигеном

В лунки планшета с преадсорбироваными антителами вносят по 50 мкл исследуемого раствора либо стандартных разведений антигена. Разведения антигена должны быть приготовлены на основе PBST, поскольку Tween-20 снижает неспецифичное связывание белковых молекул друг с другом и с поверхностью планшета. И исследуемый раствор, и стандартные разведения антигена вносят попарно (либо по 3 повторности), используя по две (три) лунки на каждое разведение белка. Инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Отмывка осуществляется раствором PBST 3 раза.

IV. Инкубация с антителами, конъюгированными с ферментной меткой

В лунки планшета вносят по 100 мкл раствора специфичных антител, конъюгированных с ферментной меткой. Оптимальная концентрация конъюгированных антител как правило указывается производителем (обычно используют концентрацию 2-4 мкг/мл). Инкубация с антителами, содержащими ферментную метку, проводится в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка осуществляется с помощью PBSТ 5-6 раз.

V. Проведение ферментативной реакции, сопровождающейся появлением окрашенного продукта

В лунки вносят по 100 мкл раствора субстрата и инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре и постоянном перемешивании.

VI. Остановка ферментативной реакции

Перед измерением оптической плотности проводят остановку цветной реакции с помощью 0,5 М H2SO4. В лунки с рабочим раствором ОФД после инкубации вносят по 50 мкл раствора 0,5 М серной кислоты. После этого можно сразу приступать к измерению оптической плотности.

VII. Измерение оптической плотности

Оптическая плотность раствора окрашенного продукта измеряется при λ=490 нм с использованием планшетного спектрофотометра.

Версия для печати

Подробнее об иммуноглобулинах

Всего человеческий организм вырабатывает 5 известных классов антител, которые обозначаются Ig (что расшифровывается как иммуноглобулины), которые принадлежат классам A, M, G, E, и D. Все они имеют большое значение в интерпретации результатов ИФА – анализа. Конечно, комплексов значительно больше, и далеко не все они еще открыты. Но в диагностике разных болезней наиболее ценны первые три типа антител. Анализ крови на ИФА использует максимум информации: момент появления антител в крови, изменение их концентрации в зависимости от времени, срок исчезновения, а также тип специфических антител.

Так, участниками первичного, острого инфекционного процесса являются иммуноглобулины класса М, которые всегда свидетельствуют об острой фазе, даже в том случае, когда клинически болезнь протекает стерто. Характерный пример – безжелтушная форма острого вирусного гепатита В или С. Иммуноферментный анализ крови на гепатиты покажет, что у человека есть острый гепатит, и такие симптомы, как боли в подреберье, сухость во рту, ломота в суставах и другие неспецифические симптомы становятся легко понятными.

Читайте также:  Плохой анализ мочи при беременности

Спустя несколько недель эти антитела обнаруживаются во все более исчезающей концентрации, уступая иммуноглобулинам класса G. Они определяются в крови долгие месяцы, и даже годы, и свидетельствуют или о выздоровлении, и тогда могут оставаться пожизненно, формируя прочный иммунитет. Это свидетельствует о мощной защите от антигенов возбудителей. Так, именно антитела этого класса делают человека невосприимчивым к повторным случаям заболевания сибирской язвой и чумой. Но бывают случаи, когда эти антитела не препятствуют при наличии антигенов их вредному влиянию. В таком случае речь может идти о повышении активности хронического процесса.

Что касается IgE, то он имеет применение в диагностике различных паразитарных инвазий и аллергических состояний, а IgD выполняет вспомогательную функцию: метод иммуноферментного анализа позволяет использовать его в комплексной диагностике бронхиальной астмы и аутоиммунных состояний. Конечно, расшифровка ИФА-анализа значительно более сложная, и специалисты – иммунологи могут рассказать гораздо больше. По каким же показаниям пациент может самостоятельно обратиться в лабораторию, чтобы выполнить исследования?

Как проводят анализ ИФА

В условиях оборудованных лабораторий и медицинских центров определение трепонем методом иммуноферментной реакции может производиться несколькими методами, которые называются прямыми и непрямыми. Однако в основе данных реакций лежит один способ, который позволяет произвести анализ на сифилис методом ИФА. Проводится данный тест определенным образом.

У врача лаборанта имеется специальный планшет – панель с лунками в виде углублений округлой формы в количестве до ста. Используются также специально приготовленные концентрированные антигены к сифилису в наборах для данного анализа, которые помещаются в лунки планшета ИФА. После взятия крови пациента в утренние часы натощак из крови отделяется сыворотка и помещается в лунки с антигенами. В лунках происходит реакция связывания антигена с антителами.

Метод ИФА на сифилис основан на реакции связывания иммунных соединений первого этапа и конъюгатов со специальной ферментной меткой, которая нужна для считывания качества реакции. На данном этапе помимо ферментной пероксидазы вносится хромогенные красящие вещества, для окрашивания материала в зависимости от исхода реакции.

На основании появившихся окрашенных лунок в планшете производится расшифровка теста. В наборах к различным методам ИФА прилагаются таблицы цветовых схем, по которым определяется количество, уровень иммуноглобулинов, антител из сыворотки пациента в 1 единице объема.

Также для оценки исхода реакции используется специальное оборудование — спектрофотометр для проведения фотометрирования и оценки плотности материала в лунках по сравнению с контрольными пробами. На основании плотности и получают результат, четко установленный для каждого возбудителя сифилиса в пределах норм и патологии.

Общая информация

Иммуноферментный анализ крови может использоваться для определения уровня гормонов, иммуноглобулинов, комплексов иммунологического типа, а также ряда биологически активных веществ. В качестве материала для такого исследования можно сдать кровь, спинномозговую жидкость, содержимое стекловидного тела и т.д.

Иммуноферментный анализ крови в последнее время применяется все чаще из-за целого ряда преимуществ:

  • чувствительность свыше 90 процентов;
  • стабильное хранение ингредиентов нужных для проведения;
  • быстрая и удобная диагностика;
  • минимальные затраты материалов;
  • автоматизированный процесс;
  • невысокая стоимость.

Кроме этого, анализ крови методом ИФА позволяет на раннем этапе выявить инфекции, в том числе гепатит. Именно поэтому его иногда рекомендуют вместо ПЦР-исследования, а также при беременности. Однако без минусов не обходится. Результаты такого тестирования будут говорить лишь об ответе организма на возбудителя, однако сам он определен не будет. В большинстве случаев рекомендуется сочетание тестов ИФА и ПЦР.

С помощью ИФА тестирования можно узнать результаты по целому набору. В частности, будет определена норма гормонов щитовидной железы, наличие онкомаркеров, ряда инфекций. Норма при этом подбирается для каждого показателя отдельно. Так для взрослых людей ИФА в норме должен продемонстрировать цифры по ТГ в пределах 70 МЕ/мл, по Т4 в промежутке от 64 до 146 нмоль/л, Т3 подсчитывается в количестве 1,8-2,8 нмоль/л.

При планировании беременности такое тестирование может сдаваться для определения половых гормонов. В частности, лютеинизирующего. Его значения будут меняться в зависимости от дня цикла. В частности, максимальный показатель, который может наблюдаться, составляет 150, а минимальный 1 мЕд/л.

Когда ИФА используется для определения полового гормона у мужчин, нормальным показателем будет цифра в пределах от 0,5 до 10 мЕд/л. Если исследуется хронический гонадотропин, то результаты будут варьироваться от пола человека. В частности, для взрослых мужчин и женщин при отсутствии беременности показатель должен быть в пределах 5 мЕд/мл. Если же тестирование выполняется во время беременности, то результаты могут быть различные, в зависимости от триместра, вплоть до десятков тысяч единиц.

Что такое хламидиоз

ПЦР, как и ИФА широко применяется в современных лабораториях для диагностики заболеваний, передающихся половым путем. При этом врачи зачастую предлагают выполнить оба теста. Многие пациенты считают, что это лишнее вытягивание денег, однако тесты эти имеют серьезное различие, хотя на первый взгляд могут показаться идентичными. Однако здесь в некоторой степени может быть применена классификация методов психологического исследования

Результаты анализов ПЦР и ИФА часто используются во время беременности, когда нужно исключить хламидийную инфекцию. Зачастую такой положительный результат на инфекцию является ответом на вопрос мужчин и женщин «Почему не получается забеременеть». Кроме риска бесплодия, хламидиоз во время беременности создает риск заражения ребенка.

Главная проблема для диагностики такой инфекции – это бессимптомное протекание. Однако специфические антитела могут быть выявлены уже спустя десять дней после инфицирования. Если ПЦР исследование во время беременности продемонстрирует наличие или отсутствие таких возбудителей, то ИФА расскажет вам в какой стадии сейчас процесс

Такое исследование также важно, чтобы оценить результаты терапии

Расшифровка анализа

Анализ на гепатит или любой другой возбудитель в ИФА исполнении нередко вызывает вопросы. В частности, как проводится расшифровка. На данный момент в результатах указывается один из пяти иммуноглобулинов: IgА, IgM, IgG, IgD, IgE. Выделяются именно они, поскольку роль остальных не была выяснена до конца. Наиболее важными для исследования являются классы А, М и G.

Иммуноглобулин А в первую очередь отвечает за защитные функции слизистых. Результат на их присутствие будет отрицательный, если ведется определение заболевания в его острой форме в самом начале. Появление таких защитных маркеров обычно происходит спустя две недели с начала заболевания. Иногда положительный результат получается и того позже.

Главной функцией данных антител является обнаружение и уничтожение микроорганизмов. Количество их неизменно сокращается, если заболевание стихает. Обычно, спустя восемь недель с начала болезни положительный результат снова будет отсутствовать. Обнаружение иммуноглобулинов класса А в более поздние сроки может говорить о перетекании процесса в хронический.

В качестве главных маркеров, расшифровка которых помогает определить острую фазу патологии, выступают иммуноглобулины, относящиеся к классу М. Обнаружить в крови их можно спустя пять суток после инфицирования. Задерживаются они в крови примерно на шесть недель, после чего исчезновение их происходит быстро.

За формирование остаточного иммунного эффекта отвечают иммуноглобулины класса G. Примерно спустя месяц после инфицирования они начинают обнаруживаться в крови. В дальнейшем определение их растягивается на долгие месяцы. Нередко наблюдать их можно всю жизнь. Такие иммуноглобулины формируются как защитная реакция, которая позволяет исключить повторное инфицирование. Например, такие иммуноглобулины образуются в крови человека, переболевшего в детстве ветрянкой, а соответственно, получившего иммунитет до конца жизни. Конечно, бывают и другие инфекции, повторное возвращение которых возможно. В таком случае анализ обнаружит повторный рост данной группы иммуноглобулинов.

Иммуноглобулины Е используются для выявления паразитов в организме. Иммуноглобулин, относящийся к группе D, расположен в В-лимфоцитах и присутствует в некотором количестве у здоровых людей. Примерно в десятилетнем возрасте им достигаются свои максимальные значения. Количество такого иммуноглобулина растет во время беременности. Кроме этого, наличие его в большем, чем это принято количестве, может быть признаком бронхиальной астмы, иммунодифицитного состояния.

Расшифровка

Антитела, они же иммуноглобулины, делятся на пять классов, но обычно определяются только три из них: М,G и А, которые в организме накапливаются в разные периоды после инфицирования.

Самыми первыми появляются иммуноглобулины М, они же IgM. Возникают они с через 4-5 суток после заражения и в крови находятся полтора месяца, после чего исчезают. Если анализ ИФА показывает их присутствие, мы имеем дело с острым периодом болезни или её обострением.

Недели через три-четыре возникают IgG, то есть иммуноглобулины класса G. Они могут присутствовать у нас несколько месяцев и даже лет подряд. Если анализ ИФА проведен был два раза с промежутком в две недели, а количество IgG в обеих пробах был увеличен, речь может идти об инфекции или повторном заражении ею.

IgA, то есть антитела класса А выявляются уже после обострения инфекции или через месяц после её появления в организме. Большинство из них циркулируют в наших слизистых оболочках и только одна пятая часть – в крови. Пропадают они только после того, как все инфекционные агенты уничтожены, то есть минимум через две недели после заражения, максимум – через восемь.

Если после излечения анализ ИФА показывает их наличие, недуг перешел в хроническую стадию.

Когда расшифровка проводится, нужно обратить внимание еще и на знаки + и – в бланке. Полноценный вердикт может вынести только врач, но о некоторых особенностях организма можно судить исходя из следующих данных:

Полноценный вердикт может вынести только врач, но о некоторых особенностях организма можно судить исходя из следующих данных:

  • Об отсутствии иммунитета к инфекциям свидетельствуют такое сочетание показателей, как JgM , JgG, JgA с минусом везде;
  • О наличии иммунитета после вакцины или инфекции свидетельствуют JgM и JgA со знаком минус и JgG со знаком плюс (JgG (+));
  • Про наличие острой инфекции могут рассказать следующие показатели: JgA (-/+),JgG (-/+) и JgM (+);
  • При обострении хронических инфекций в бланке будут следующие обозначения: JgM, JgG и JgA с плюсами везде;
  • При хронических инфекциях наблюдается следующая картина: JgG (+/-),JgM (-), и JgA (+/-);
  • О выздоровлении свидетельствует пометка JgM (-).

Также нередко проводится такое исследование, как иммуноферментный анализ кровяной сыворотки. Он нужен для исследования гормонов щитовидной железы. Важны здесь показатели таких гормонов, как тироксин, свободный тироксин, трийодтиронин, свободный трийодтиронин и тиреоглобулин.

Кроме того, такое исследование пригодится для диагностики инфекционных и аутоиммунных болезней.

ИФА – иммуноферментный анализ крови: расшифровка

Опубликовал: Parazitolog в Диагностика 16 февраля, 2019

Метод диагностики (ИФА) является информативным и не слишком затратным, поэтому многие лаборатории предлагают своим клиентам данный метод (иммуноферментного анализа крови). Исследование проводится натощак, кровь для анализа берут из локтевой вены пациента. Перед ИФА желательно не курить и не употреблять алкоголь.

Что такое анализ крови, проводимый методом ИФА

Среди методов анализа крови, позволяющих оценить способность организма противостоять инфекционным болезням и показывающих фазу болезни, важное место занимает иммуноферментный анализ (ИФА). Проведение этого исследования позволяет всесторонне оценить деятельность защитной функции крови и выявить состояние иммунодефицита при инфекционных патологиях, также заболеваниях крови, аутоиммунных процессах, гормональных проблемах.

Это лабораторное исследование, которое позволяет определять наличие специфических антител (защитных факторов крови белковой природы) к определенным антигенам (болезнетворным агентам). Среди антител первостепенное значение имеют иммуноглобулины, которые могут существовать в виде иммунокомплексов.

Иммуноглобулины вырабатываются вследствие сложных нейрогуморальных реакций иммунитета человека, возникающих как ответная реакция на внедрение чужеродных антигенов. На каждый вид болезнетворного агента вырабатываются свои специфические антитела. Действуют они путем «связывания» антигена или патологического микроорганизма, образую комплексное соединение «антиген-антитело» с последующей нейтрализацией, ферментативным лизисом, реакциями фагоцитоза и выводом из организма.Именно по наличию определенных комплексов методом ИФА определяется вид возбудителя или имеющегося у больного вредного вещества.

Стоит помнить, что после пройденного курса лечения антитела могут оставаться в нашем организме очень долго, даже после того, как инфекция покинула наше тело, т.е. остается, так называемый, «серологический шрам». Приведем пример: в ночном небе тысячи звезд. Многие из этих звезд уже давно погибли, но до нас до сих пор, веками, идет их свет. По сути, мы видим только след звезды. Свет есть, а звезды уже давно нет.

Но если света нет, это не говорит о том, что звезды там не было. То же самое и с антителами. Их наличие не гарантирует присутствия в организме искомого инфекционного агента. Отсутствие антител не говорит о том, что инфекции нет. Если результат анализа методом ИФА положительный, то это значит, что нужно искать инфекцию более специфическими и дорогостоящими методами — ПЦР, бактериологические посевы. Возможен ложноположительный результат в случае, если несколько микробов обладают схожей антигенной структурой, тогда к разным микробам будут вырабатываться «похожие» антитела.

Какие бывают иммуноглобулины

Открыто и изучено 5 основных классов иммуноглобулинов – IgА, IgM, IgG, IgD, IgE. роль остальных еще до конца не выяснена и она находятся в стадии научного исследования.

Основная задача иммуноглобулина А (IgA) заключается в защитных функциях слизистых оболочек дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и мочевыделительной системы. При остром начале заболевания выявить их невозможно. Появляются эти защитные комплексы лишь со 2 недели начала заболевания, иногда позже. Основная масса иммуноглобулина А сосредоточена в слизистых тканях. Ориентировочно около 80%. Остальные антитела циркулируют в крови.

Главными и первыми маркерами острой фазы развивающейся патологии являются иммуноглобулины класса М (IgM). Обнаруживаются они к 5 суткам начала недомогания. Определить их наличие в крови можно около 6 недель. Затем они начинают быстро исчезать.

Остаточный иммунный ответ характеризует наличие в крови иммуноглобулинов класса G (IgG). Появление этих факторов в крови обнаруживается примерно через месяц после начала болезни. В дальнейшем они могут определяться в течение многих месяцев, лет и даже всю жизнь, выполняя защитную функцию от возврата (рецидива) болезни, а в некоторых случаях делая невозможным вторичное развитие патологии.

Если же количество иммуноглобулина G начало вновь расти, то можно подозревать повторное заражение. Подобный вывод можно сделать путем проведения двух-трех проб, сделанных с промежутком в 2 недели.

Иммуноглобулин Е (IgE) используется в практике паразитологии.Иммуноглобулин D (IgD) располагается на B-лимфоцитах, находится в небольшой концентрации у здоровых людей. После 10 года жизни достигает максимальных значений. Количество иммуноглобулина D увеличивается при беременности, у больных системными заболеваниями соединительной ткани, бронхиальной астмой, заболеваниями, вызванные иммунодефицитным состоянием.

Как проводится ИФА крови

Для иммуноферментного анализа в большинстве случаев используется кровь пациентов, иногда производят забор ткани стекловидного тела, жидкости спинномозгового канала, околоплодных вод.

В случае отрицательных значений иммуноглобулинов IgM, IgG, IgA можно говорить об отсутствии заболевания или его начальной фазе, также результат с минусами возможен при полном выздоровлении по прошествии значительного количества времени.

Если IgA и IgM не обнаружены, а IgG проявляется положительно, то по всей вероятности речь идет о сформированном иммунитете после инфекционного заболевания, или после прививки.

Если IgA и IgM не обнаружены, а IgG проявляется положительно, то по всей вероятности речь идет о сформированном иммунитете после инфекционного заболевания, или после прививки

В случае высокого титра IgM при отрицательных значениях IgG, IgA можно делать вывод о наличии остро протекающего инфекционного заболевания.

Одновременные положительные значения результатов иммуноглобулинов – IgA, IgM, IgG характерны для острой фазы рецидива имеющегося хронического заболевания.

Читайте также:  Лабораторные анализы

Для хронической инфекции, находящейся в фазе стихания процесса (ремиссии) ИФА показывает отрицательные значения иммуноглобулина M (IgM), при этом результат иммуноглобулинов G (IgG) и A (IgA) будет положительным.

Иммуноферментный анализ от паразитов методом ИФА

ИФА – это аббревиатура от «иммуноферментный анализ на паразитов». Она подразумевает под собой медицинское тестирование иммунной системы человека. В основу теста положена способность антител к изменению их цвета. Данный способ диагностики имеет множество положительных черт. Например, он способен обнаружить огромное множество болезней, причинами которых послужило заражение инфекцией. Наибольшую эффективность он проявляет в случаях заболеваний, вызванных паразитическими организмами.

Что дает представленная технология: определение наличия гельминтов в крови; поиск других болезнетворных микроорганизмов в теле; можно узнать причины ухудшения вашего здоровья; лечение строится также на анализах, полученных таким способом; вы можете следить за состоянием своей иммунной системы.

Еще одна хорошая черта – возможность отслеживать онкологические маркеры вне зависимости от их происхождения, но при условии их присутствия в организме, разумеется. Данный тест пригоден и для описания состояния репродуктивной системы человека. Наличие определенных белков, гормонов и пептидов, позволяют судить о потенциале партнера в плане зачатия ребенка, а также предположительном качестве будущего плода.

Анализ крови на лямблии – довольно популярная практика у современных медиков. К тому же, данный метод исследования является прекрасным инструментом для биомедицинской аналитики и количественной статистики в плане специфичных антигенов.

Каким образом используется иммуноферментный анализ методом ИФА

Будет большой ошибкой перепутать способ анализа ИФА с методом зондирования и последующего изучения кала. Последние проводятся при помощи методов на микроскопическом уровне, когда берется сданный пациентом образец кала, либо же он отбирается у потенциального больного непосредственно в медицинском учреждении. В образце пытаются обнаружить глистные инвазии и другие компоненты, так или иначе связанные с жизнедеятельность паразитов. Изучаются не только микроскопические паразитирующие организмы, но и их остатки, их яйца и личинки.

Правда, это более сложные случаи, поэтому качество подобного анализа будет сильно зависеть от работников лаборатории, выполняющей тестирование. Особенности технологии и отличие ее от старых лабораторных исследований:

  • теперь вместо пробы кала используется кровь, для определения наличия гельминтов;
  • изучение пробы проводится в лаборатории очень быстро, уже на следующий день можно получить полную информацию;
  • стоимость лабораторного исследования недорогое, так как теология очень проста;
  • анализ крови на гельминтов дает высокие показатели точности.

Актуальность и правдоподобность результатов теста прямопропорциональны квалификации медицинского персонала, технической оснащенности лаборатории, а также отсутствия какой-либо халатности или невнимательности у медиков. Однако, даже самый внимательный и ответственный лаборант испытает огромные трудности, если паразит присутствует в организме в его минимальной популяции, либо же выполнил кладку непосредственно в момент проведения тестирования.

Анализы при иммунологическом анализе крови методом ИФА

О том, какие бывают анализы крови с точки зрения иммунологической системы человека, мало кто знает, так эти анализы не так распространены. Как правило, такое исследование крови дает информацию о вирусе иммунодефицита в организме человека и является анонимной, так как проводится по желанию пациента.

В основном, для проведения ИФА анализа, исследуемым биологическим материалом является кровь, однако, исследованию может подвергаться спинномозговая жидкость, содержимое стекловидного тела, околоплодные воды и др.

Для забора используют взятую натощак из вены кровь, из которой для исследования методом центрифугирования получают сыворотку. Кроме этого, изучение сыворотки крови способно выявить ряд венерических заболеваний (сифилис, герпес, хламидиоз), а также все виды гепатита, корь, краснуху, паротит и токсоплазмоз.

В основном, для проведения ИФА анализа, исследуемым биологическим материалом является кровь, однако, исследованию может подвергаться спинномозговая жидкость, содержимое стекловидного тела, околоплодные воды и др.

Иммуноглобулины — это иммунные молекулы, способные связываться и нейтрализовать большинство инфекционных возбудителей и токсинов в организме. При этом важнейшей характеристикой иммуноглобулинов является их специфичность, то есть способность связываться с определенным антигеном. Именно это свойство используется для проведения анализа крови на иммуноглобулин.

Существует пять типов иммуноглобулинов, однако наиболее изученными являются иммуноглобулины А, М, и G. Иммуноглобулины М и G проявляют свою активность в крови. Иммуноглобулины А являются, своего рода, барьером на поверхности слизистых оболочек, так как присутствуют там в большом количестве.

Иммунологический анализ крови позволяет определять тип иммуноглобулинов, благодаря этому ИФА позволяет не только диагностировать заболевание, но и определить стадию данного и отслеживать динамику заболевания:

  • в первые 2 недели заболевания обнаруживаются только иммуноглобулины А;
  • со 2-й по 3-ю неделю заболевания в крови обнаруживаются иммуноглобулины А и М.;
  • Сс3 по 4 неделю анализ крови на иммуноглобулин определяются все три типа;
  • при выздоровлении в крови пропадают иммуноглобулины М, а количество А и G снижается в 2 – 4 раза;
  • при наличии хронического процесса в крови обязательно присутствуют иммуноглобулины G, иммуноглобулины М отсутствуют, иммуноглобулины А могут как присутствовать, так и отсутствовать.

Область применения иммунологического анализа крови методом ИФА

  • Диагностика вирусных заболеваний: гепатиты, герпес, Эпштейн-Барр вирус, цитомегаловирус и др;
  • инфекции передающиеся половым путем: хламидиоз, гонорея, трихомонада, микоплазма, уреаплазма;
  • сифилис; эндокринология (определение уровня гормонов);
  • онкомаркеры (диагностика онкологических заболеваний); иммунология (диагностика иммунодефицита);
  • аллергология (диагностика и лечение аллергий).

Серологический анализ крови — лабораторный метод исследования крови, который применяется с целью диагностики инфекционных заболеваний и определения стадии инфекционного процесса. Серологическая реакция основана на взаимодействии антител и антигенов.

Определение антигенов используют для определения родовой и видовой принадлежности микроорганизмов. Данный метод исследования применяется в урологии и венерологии. Кровь для серологического анализа крови берется утром натощак из вены.

Показания к назначению и выявляемые заболевания методом ИФА

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА.

Вот наиболее распространенные цели анализа:

  • диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний: IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С; IgG к ВИЧ; Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции; Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр; Ig M и IgG к герпетическим инфекциям; Ig M и IgG к токсоплазмозу;
  • Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям; IgG к паразитарным заболеваниям; Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем; IgG к хеликобактерной инфекции. Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний. Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других). Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

Преимущества метода ИФА

Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке.

Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

Недостатки метода ИФА

К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека. ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Возможные результаты ИФА

В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный).

Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).

Иммуноферментный анализ крови с расшифровкой показателей

Диагностические методики современности дают возможность в условиях лаборатории выявить то или иное заболевание с помощью специальных анализов. К одним из таких стоит отнести иммуноферментный анализ крови, благодаря которому можно подтвердить предварительно поставленный диагноз.

Что такое иммуноферментный анализ крови

Иммуноферментный анализ ИФА является одним из самых эффективных и современных способов, позволяющих выявить болезни инфекционного плана , нарушения, связанные с иммунными и гормональными сбоями, а также онкологические процессы. Во время проведения анализа в крови можно обнаружить антитела, вырабатывающиеся при наличии в организме инфекции. Учитывая этот нюанс, обнаружить болезнь можно даже на самом раннем этапе её развития.

Что лежит в основе методики

В основе результатов ИФА анализа лежит получение химических реакций на ферменты, служащие особенными опознавательными знаками для распознания антител. Следовательно, во время иммунохимических реакций антитела начинают взаимодействовать с некоторыми антигенами. Всё это даёт основания утверждать, что ложные результаты при сдаче крови на ИФА минимальны.

Исследование позволяет определить количество иммунных клеток, их свойства, а также наличие необходимых антител

Положительным результат считается тогда, когда обнаруживается окрашивание раствора. Окрас сигнализирует о том, что антигены взаимодействуют с антителом. В случае когда ничего подобного не происходит, результат является отрицательным.

Положительные стороны ИФА

Учитывая, что в основе методики лежит способ получения иммунного ответа от человеческого организма, такой метод является непрямым методом диагностики.

Плюсы иммуноферментного анализа крови:

  • Наличие разных модификаций анализа.
  • Высокая точность и технологичность.
  • Вероятность получения ошибочного анализа сводится практически к нулю.
  • Применяется для диагностики заболеваний не только у взрослых, но и у детей.
  • Универсальность. Забор анализа позволяет подтвердить наличие заболевания или наоборот опровергнуть опасения.

Какие заболевания можно выявить с помощью ИФА

Как уже говорилось выше, при помощи анализа можно выявить целый ряд нарушений, характерных для наличия того или другого недуга. Поэтому многие специалисты назначают большинству пациентов именно ИФА.

На сегодняшний день анализ крови с помощью вышеописанной методики даёт возможность обнаружить наличие многих инфекций, приведенных в таблице:

Название заболеванияОписание
Вирусные гепатитыЭто распространённые и опасные недуги печени, которые обычно вызваны вирусами.
На сегодняшний день существует пять видов вирусов, которые могут привести к гепатиту. Их обозначают такими латинскими буквами: A, B, C, D, E.
СифилисЭто венерическое заболевание, которое очень легко выявить методом ИФА.
Очень важно обнаружить этот недуг как можно быстрее, чтобы он не сказался негативно на общем состоянии здоровья.
Цитомегаловирусная инфекцияЦитомегаловирус является возбудителем заболевания.
Болезнь может передаваться от матери к ребёнку (внутри утробы), воздушно-капельным способом или при половом контакте с носителем. Поэтому обычно анализ крови на ИФА назначают всем будущим мамам.
ВИЧВирус иммунодефицита – это то заболевание, которое прогрессирует очень медленно, но, несмотря на это, является крайне опасным.
Причина заключается в том, что вирус постепенно атакует клетки иммунитета, в результате чего организм становится уязвимым к любым, даже к самым незначительным микробам и бактериям.
ХламидииБлагодаря иммуноферментному анализу можно не только подтвердить наличие инфекции, но и определить очень точно гормоны, антитела, антигены и многое другое, что позволяет качественно и эффективно провести лечение.
Кроме этого, анализ даёт возможность максимально точно понять, когда произошло заражение и какие негативные последствия были вызваны в организме при наличии хламидий.
ГерпесГерпес может передаваться и воздушно-капельным путём, и во время незащищённого полового акта. Этот недуг опасен тем, что негативно сказывается на работе многих систем организма.
Определить вирус можно качественным и количественным способами. Если используется первый метод, тогда удаётся выявить наличие антител, тип вируса, а также возможность существования предшествующих рецидивов. Что касается количественного, то он даёт возможность определить тип антител или, проще говоря, состояние иммунитета против вируса.

Принимая во внимание тот факт, что выявление заболевания возможно даже на раннем этапе, недуг можно начать лечить сразу же, следовательно, появляется возможность забыть о нём достаточно быстро.

Как следует готовиться к сдаче анализа

Иммуноферментный анализ крови сдаётся из вены, а не из пальца, как думают некоторые. Дабы данные были верны, следует выполнить ряд несложных правил.

Проба крови для исследования берется из локтевой вены

  • За пару дней до сдачи анализа не поднимать тяжестей и не выполнять тяжёлую физическую работу.
  • За сутки не употреблять алкоголь и не курить (нельзя даже находиться в накуренном помещении).
  • Соблюдать максимальное спокойствие.
  • Сдавать анализы можно не раньше, чем через 10 дней после того, как употреблялись какие-либо лекарственные средства.

Некоторые таблетки могут влиять на результат анализа, поэтому если отменить приём невозможно, об этом следует сказать доктору.

Некоторые специалисты рекомендуют также за пару дней до анализа сесть на лёгкую диету. Речь идёт о воздержании от копчёной, жареной и солёной пищи. Если кровь сдаётся, чтобы выявить наличие гепатита, то нельзя употреблять также цитрусовые в виде фруктов и в виде сока.

Специалисты рекомендуют за пару дней до анализа сесть на лёгкую диету

В случае когда необходимо выявить нарушение гормонального фона, на общий анализ может повлиять месячный цикл женщин. В этом случае доктор сам назначает дату, когда сдача анализа будет наиболее оптимальной.

Ниже будет представлена таблица, в которой указаны изменения нормального уровня лютеинизирующего полового гормона, исходя из дня менструального цикла.

Данные изменений нормального уровня лютеинизирующего полового гормона в таблице

Кол-во днейУровень гормона
1-12 день12-14 мЕд/л
12-14 день24-150 мЕд/л
С 15 дня до начала нового цикла2-17 мЕд/л

Анализ даёт возможность выявить разные виды антител в организме, которые показывают себя на каждом этапе развития болезни. Когда недуг только дал о себе знать, активно вырабатываются антитела класса IgM. Если их удалось обнаружить, значит, возникло какое-то заболевание.

После выработки IgM начинается производство IgG свидетельствующее о том, что человек либо является носителем инфекции, либо он недавно переболел чем-то инфекционным. Обычно выявить IgG можно после 3-4 недель, отсчитывая от начала развития IgM, но некоторые антитела могут находиться в организме годами.

Есть ещё такой класс антител, как IgA, который свидетельствует о наличии в организме хронической инфекции. При его обнаружении начинается незамедлительное лечение, а после этого ещё раз сдаётся анализ крови ИФА, дабы убедиться, что лечение принесло свои плоды.

Немного иначе ситуация обстоит с детьми в возрасте до полутора лет, в организме которых на первых этапах жизни для обеспечения надёжной защиты от вирусов в большом числе присутствуют антитела IgG. Поэтому при проверке малышей основное внимание уделяют классу IgM.

Ниже представлена таблица, в которой указаны комбинации наличия или отсутствия инфекции.

Таблица расшифровок норм анализа крови ИФА на наличие (отсутствие) инфекций

IgMIgGIgAРасшифровка показателей
Иммунитет к инфекции отсутствует
+Имеется поствацинальный (специфическая невосприимчивость к инфекционному заболеванию, появляющаяся в результате вакцинации) или постинфекционный иммунитет
+-/+-/+Острая инфекция
+++Обострение хронической инфекции
+/-+/-Наличие хронической инфекции

Делая выводы, можно сказать, что когда в организме обнаруживаются антитела определённого вида, тогда в таблице рядом со значением стоит знак «+».

Иногда после получения анализа доктор может назначить проведение ещё одного с целью выявление количественного содержания вещества в организме.

Расшифровкой иммуноферментного анализа крови должен заниматься только специалист, который сопоставит полученные результаты с имеющимися симптомами и назначит грамотное лечение.

Что такое ИФА анализ крови и почему это важно для диагностики

ИФА анализ крови, что это такое? Наверное, все помнят, что в ответ на проникновение вирусов для борьбы с ними организм начинает вырабатывать комплексы антител. Эти иммунологические соединения обладают способностью распознавать и уничтожать «свой» возбудитель. На этом и построено исследование, которое позволяет определить наличие и количество иммуноферментов, свойственное для определенного заболевания.

Немного общих сведений об анализе

ИФА, или иммуноферментный анализ крови, дает возможность определить специфические антитела (иммуноглобулины) к определенному виду возбудителя. Метод ИФА основан на следующем:

  • в ответ на внедрение микроорганизма иммунная система начинает вырабатывать антитела;
  • иммунокомплексы отличаются специфичностью и уничтожают только чужеродные клетки;
  • при добавлении в сыворотку крови больного экстракта возбудителей, если имеются антитела, образуется стандартное соединение: антитело-антиген, при этом происходит активное выделение ферментов.

О положительном или отрицательном тестировании в лаборатории судят по тому, произошла ли реакция в плазме после добавления к ней возбудителя, и насколько интенсивным был процесс.

Норма для здорового человека – это единичные иммунокомплексы или их отсутствие.

Анализ ИФА не указывает на какое-то определенное заболевание, он позволяет лишь предположить примерно тип возбудителя, вызвавшего появление иммунокомплексов и определить стадию воспалительного процесса. Это позволяет скорректировать дальнейшие методы диагностики.

Об иммуноглобулинах

Что такое иммуноглобулин, многим понятно: иммунный комплекс, образовавшийся в ответ на проникновение чужеродных клеток. Но какими они бывают?

ИФА метод позволяет выделить 5 разновидностей иммуноглобулинов:

Основными для диагностики считаются A, M и G (некоторые источники по диагностике указывают только три этих иммунных комплекса), поэтому стоит рассмотреть их особенности:

  • А – отвечает за защиту слизистых. При острых патологиях он появляется в крови спустя 14 дней после инфицирования, а иногда и позже и исчезает через 8 недель от начала проявления признаков болезни. Если иммунокомплекс IgA сохраняется дольше, то можно предположить переход заболевания в хроническую форму. Антивирус А указывает на поражение слизистой мочевого пузыря, кишечника или органов дыхания.
  • М – служит указателем острой фазы заболевания. Отмечается в плазме спустя 5 дней от момента проникновения инфекции (даже если нет выраженных признаков заболевания) и исчезает через 6 недель, если происходит разрешение острого процесса.
  • G – остаточная реакция и иммунокомплексы сохраняются длительное время (иногда на протяжении всей жизни) и предотвращает повторное инфицирование или возникновение рецидивов. На формировании антител G основан принцип вакцинации, когда при введении ослабленных микробов и вирусов у человека вырабатывается длительный иммунитет. Повышение G – показатель того, что возбудитель повторно проник в организм или обострилась хроническая инфекция.

Иммуноферментный анализ крови на E и D не входит в обязательную программу обследования. Он назначается в следующих случаях:

  • Е – когда предполагают, что патология вызвана паразитами;
  • D – если есть вероятность, что патология имеет системный характер или возникла по причине возникшего иммунодефицита.

Анализ крови методом ИФА дает возможность обнаружить специфические антитела к чужеродным агентам уже на ранних стадиях патологии. В основе тестирования лежит стандартная реакция антиген-антитело, позволяющая определить наличие антител к возбудителю заболевания.

Показания для лабораторной диагностики

Анализ крови на иммуноферментный анализ показано проводить при подозрении на возникновение следующих патологий:

  • онкология;
  • вирусные гепатиты (при всех типах вируса);
  • герпетические поражения слизистой или кожи;
  • некоторые инфекционные процессы (сальмонеллез, корь, энцефалит, дизентерия);
    сифилис;
  • инфекции, передающиеся половым путем (гонорея, хламидиоз, микоплазмоз и др.);
  • атопические процессы (аллергии);
  • цитомегаловирус;
  • эндокринные сбои;
  • иммунодефицит;
  • бесплодие;
  • глистные инвазии.

Также ИФА анализ крови позволяет спрогнозировать течение некоторых неинфекционных заболеваний:

  • инфаркта;
  • инсульта;
  • неврологических расстройств;
  • почечных патологий.

Также с профилактической целью проводят ИФА во время медосмотров.

ИФА диагностика позволяет выявить более 600 антител к инфекционным и неинфекционным антигенам, что делает исследование незаменимым при выявлении болезни на раннем этапе. Методика ИФА считается наиболее информативной при обследовании на ВИЧ и на онкологию.

На чем основана методика

Кажется, что иммуноглобулинов всего пять, а с их помощью определяется большое количество патологических процессов. Возможно ли такое?

Возможно. Это происходит потому, что подсчет иммуноглобулиновых соединений делается по разным тестам:

  • антинуклеарные тела (указывают на аутоиммунные процессы);
  • ревматоидный фактор (выявляет ревматические поражения);
  • двуспиральные ДНК (выявляется группа белков, появляющихся при системных болезнях);
  • ENA скрин (определяет несколько видов антигенов, свойственных при ревмофакторе или при системных соединительнотканных поражениях);
  • антикардиолипиновые антитела (иммунокомплексы образуются при ВИЧ, эпилепсии и некоторых системных процессах);
  • ANGA скрин (соединения характерны для аутоиммунных процессов);
  • цитрулиновый пептид (антитела появляются при ревматоидном артрите);
  • С-реактивный белок (С-реактивный протеин свидетельствует о наличие острого или обострении хронического процесса);
  • иммунофлюоресцентный анализ (укажет на гормональный сбой или на наличие злокачественных новообразований).

Расшифровка анализа проводится с учетом применяемых методик. Оценка полученных данных довольно сложная и проводится врачом, а для пациентов, желающих перед посещением доктора самостоятельно проанализировать полученные из лаборатории данные, можно предложить следующую таблицу:

В таблице указаны лишь общие сведения. В анализе ИФА при расшифровке врачом учитывается не только наличие иммуноферментных соединений, но и их количество, а также методики, применяемые для проведения исследования.

Преимущества метода

ИФА анализатор довольно часто применяется при дифференциальной диагностике болезней и для контроля качества лечения. Методика имеет ряд преимуществ:

  • Дешевизна. Диагностические наборы стоят относительно недорого.
  • Простота. Нет необходимости в оснащении сложной аппаратурой, и исследование может быть проведено в любой лаборатории.
  • Высокая информативность. Достоверность определения вида антигена около 90 %.
  • Быстрота. Анализатор ИФА автоматизирован, в экстренной лаборатории данные исследования можно получить уже через несколько часов после сдачи биоматериала.
  • Ранняя диагностика. Иммуноглобулины появляются в крови на начальной стадии заболевания.
  • Длительность хранения. Взятый у пациента материал может сохраняться до года.
  • Стадия болезни. Соотношение и основные характеристики обнаруженных в плазме иммуноглобулинов дают возможность определить тяжесть течения и стадию заболевания.
  • Контроль динамики. При проведении лечения ИФА иммуноферментный анализ позволяет проводить коррекцию проводимой терапии в зависимости от лабораторных показателей.
  • Легкость забора биоматериала. Для диагностики достаточно небольшого количества венозной крови.

Анализ крови ИФА высокоинформативен и позволяет выявить патологию на начальном этапе развития, но только на основании лабораторного исследования диагноз не ставится. Окончательная диагностика возможна лишь после полного обследования пациента.

Недостатки методики

Несмотря на ряд преимуществ, исследование крови методом иммуноферментации имеет некоторые недостатки:

  • невозможность со 100% точностью определить вид возбудителя (при некоторых заболеваниях вырабатываются похожие иммуноглобулины);
  • вероятность получения ложноположительного результата (бывает у беременных или при несоблюдении правил подготовки к анализу).

На достоверность диагностики может повлиять следующее:

  • табакокурение и употребление спиртного;
  • нервное перенапряжение или стресс;
  • физические нагрузки;
  • прием некоторых лекарств (кровь сдавать можно только спустя 10 дней после отмены препаратов).

Эти недостатки анализа крови на ИФА не мешают врачам признавать методику наиболее удобной и информативной для выявления болезней на ранних стадиях. При необходимости, для уточнения полученных из лаборатории данных, больным могут назначаться более специфические анализы, позволяющие вернее определить тип возбудителя.

ИФА в паразитологии


IgE свойственен глистным инвазиям, но может появляться в плазме и при некоторых аллергиях (находится в крови в небольшом количестве). Несмотря на вероятность получения ложноположительных реакций, кровь на ИФА часто назначается паразитологами для обнаружения следующих видов паразитов:

  • гельминты;
  • токсоплазма;
  • амебы;
  • трихинеллы;
  • лямблии;
  • простейшие;
  • плоские черви.

Глистные инвазии, как и инфекционные возбудители, вызывают выработку антител Е. Рост в крови этого маркера почти всегда указывает на наличие в организме паразитов (при атопических реакциях он остается на прежнем уровне или незначительно повышается).

Паразиты не обязательно располагаются на слизистой кишечника, они могут проникать в ткани почек, сердца и других органов. Если паразитирование в кишечнике легко выявляется наличием в исследуемом кале яиц, личинок или взрослых особей, то поражение других тканей определяется только при помощи иммуноферментной реакции.

Теперь многим стало понятно, что такое ИФА и уже не пугает загадочное лабораторное сокращение. Действительно, исследование назначается не только для подтверждения заболеваний. Некоторые иммуноферментные тесты (сифилис, ВИЧ) входят в обязательную программу медицинского обследования, и получение отрицательного результата служит показателем здоровья. А если тестирование окажется положительным, то и это не повод для паники: чем раньше начнется лечение обнаруженной болезни, тем благоприятнее прогноз.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА) — один из видов иммунохимического анализа. Он основан на высокоспецифической иммунологической реакции антигена (АГ) с соответствующим антителом (АТ) с образованием иммунного комплекса. При этом один из компонентов конъюгирован с ферментом. В результате реакции фермента с хромогенным субстратом образуется окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически.

Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии:

  1. Стадия узнавания исследуемого соединения специфическим антителом;
  2. Стадия формирования связи конъюгата с иммунным комплексом или со свободными местами связывания;
  3. Стадия превращения ферментной метки в регистрируемый сигнал.

В реакции участвуют:

  • Твердая фаза;
  • АГ и АТ;
  • Конъюгат (антиген или антитело, меченые ферментом);
  • Ферментный маркер;
  • Субстрат;
  • Стоп-реагент (чаще всего применяют серную кислоту).

Твердая фаза

В качестве твердой фазы для проведения ИФА можно применять различные материалы: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и другие. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и др. планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки.

Антигены и антитела

АГ и AT, используемые в ИФА, должны быть высокоочищенными и высокоактивными. АГ должны обладать высокой антигенностью, оптимальной плотностью расположения и количеством антигенных детерминант.
Чувствительность ИФА зависит от концентрации, активности и специфичности используемых антител. Используемые АТ могут быть поли- или моноклональными, различного класса (IgG или IgM) и подкласса (IgG1, IgG2).
Чувствительность и специфичность метода повышается при использовании моноклональных антител. В этом случае появляется возможность обнаруживать низкие концентрации АГ (AT) в образцах.

Ферментные маркеры: наибольшее применение нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфатаза (ЩФ) и β-D-галактозидаза.

Субстраты

Выбор субстрата, в первую очередь, определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция «фермент-субстрат» высокоспецифична.

  • Для ПХ в качестве субстрата используют 3,3’,5,5’-тетраметилбензидин (ТМБ хромоген). Происходит цветная реакция, интенсивность которой зависит от количества связанного определяемого вещества;
  • Для ЩФ субстратом является 4-нитрофенилфосфат;
  • β-D-галактозидаза катализирует гидролиз лактозы с образованием глюкозы и галактозы.


Классификация ИФА

В основу классификации методов ИФА положено несколько подходов:

1 — по типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА:

  • В конкурентном ИФА на первой стадии в системе присутствуют одновременно анализируемое соединение и его аналог, меченный ферментом и конкурирующий за центры специфического связывания с ним;
  • Для неконкурентных методов характерно присутствие на первой стадии только анализируемого соединения и специфичных к нему центров связывания.

2 — по принципу определения исследуемого вещества:

  • Прямое определение концентрации вещества (АГ или АТ). Используют антитела к исследуемому веществу, соединенные со специфической меткой. В этом случае метка будет находиться в образовавшемся специфическом комплексе АГ-АТ. Концентрация определяемого вещества будет прямо пропорциональна регистрируемому сигналу;
  • Непрямое определение концентрации вещества – по разности общего числа мест связывания и оставшихся свободными центров связывания. Концентрация определяемого вещества при этом будет возрастать, а регистрируемый сигнал снижаться, следовательно, в данном случае прослеживается обратная зависимость от величины регистрируемого сигнала.

3 — по типу результатов:

  • Количественный;
  • Полуколичественный;
  • Качественный.


Конкурентный ИФА

  1. На твердой фазе иммобилизованы специфические моноклональные антитела;
  2. В лунки панелей вносят в известной концентрации антиген, меченный ферментом, и исследуемый образец. Параллельно в соседних лунках ставят положительный и отрицательный контроли. Для построения калибровки используют стандартный немеченый антиген в различных разведениях. Проводят инкубацию и отмывку;
  3. Добавляют субстрат, инкубируют, останавливают реакцию при развитии оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем;
  4. Проводят учет результатов на ИФА-ридере. Концентрация определяемого вещества обратно пропорциональна оптической плотности.

Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.


Неконкурентный «сэндвич» – вариант ИФА

Основным достоинством метода является высокая чувствительность, превосходящая возможности других схем ИФА.

  1. На твердой фазе иммобилизованы моноклональные антитела или аффинно-очищенные поликлональные антитела;
  2. В лунки панелей вносят исследуемый образец, параллельно ставят положительный контрольный образец и отрицательный контрольный образец в различных разведениях. Инкубируют и отмывают;
  3. В лунки вносят меченные ферментом моноклональные или поликлональные антитела —конъюгат. После инкубации проводят отмывку для удаления несвязавшихся антител;
  4. Вносят субстрат, инкубируют. Реакцию останавливают при достижении оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем;
  5. Проводят учет результатов на ИФА-ридере. Концентрация определяемого вещества прямо пропорциональна оптической плотности.

Качественный анализ часто используют при скрининговых исследованиях и диагностике инфекционных заболеваний. Результат исследования определяется при сравнении его оптической плотности с расчетной величиной критической оптической плотности (ОПкрит., «Cut-off»).

Формулу для расчета «Cut-off» указывают в инструкции к тест-системе. В расчете «Cut-off» могут участвовать как усредненные значения оптических плотностей положительных и отрицательных контролей, так и оптическая плотность специального контрольного образца — контроля уровня среза.
Если оптическая плотность образца выше, чем Cut-off, образец считается положительным на специфические антитела.

Для полуколичественного варианта проведения методики рассчитывают отношение между средней оптической плотностью образца и оптической плотностью Cut-off.

Образцы рассматриваются как:

  • положительные, если отношение более 1,1;
  • сомнительные, если отношение 0,9–1,1;
  • отрицательные, если отношение менее 0,9.

Сомнительные результаты анализа нельзя однозначно интерпретировать и для уточнения результата необходимо повторить обследование через 1–2 недели.


Методом ИФА определяют
:

  • Гормоны;
  • Онкомаркеры;
  • Антитела (IgG, IgM) к возбудителям заболеваний — ToRCH-инфекций, туберкулеза, сифилиса, к вирусу гепатита С (ат ВГС), микоплазме, хламидиям, лямблиям, Helicobacter pylori и др.;
  • Антигены вирусов —гепатит D, Е, А (ВГD, ВГЕ, ВГА), гепатит С (ВГСсore), гепатит В (НВs, НВе НВсore);
  • Аутоиммунные заболевания.

Добавить комментарий